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A seconda della differenza nella determinazione di antigeni e anticorpi, esistono molte modalità di misurazione ELISA automatiche, come metodo diretto, metodo indiretto, metodo a sandwich a doppio anticorpo (diretto, indiretto), metodo di inibizione competitiva (diretto, sandwich, ecc.), metodo di cattura, ecc. Nei laboratori clinici, Le modalità di misurazione ELISA comunemente utilizzate includono il metodo sandwich a doppio anticorpo, il metodo indiretto, il metodo a sandwich a doppio antigene, il metodo di inibizione competitivo e il metodo di cattura.

Nella determinazione degli antigeni, la modalità più comunemente utilizzata per la determinazione degli antigeni della macromolecola proteica è il metodo del sandwich a doppio anticorpo. Per piccole molecole con un solo epitopo singolo, viene utilizzato il metodo di inibizione competitiva; La determinazione degli anticorpi di solito utilizza il metodo indiretto, il metodo a sandwich a doppio antigene, il metodo di inibizione competitivo e il metodo di cattura.

1. doppio anticorpo metodo sandwich di Stazione di lavoro ELISA

For macromolecular proteins containing multiple epitopes, the Stazione di lavoro ELISA uses the double antibody sandwich method to determine it is quite simple. The existing commercial kits for measuring protein antigens basically all adopt this measuring mode.

The first full-automatic ELISA kits for double-antibody sandwich detection of antigens all adopted the "two-step method." Later, in order to shorten the detection time and simplify the operation steps, reagent manufacturers gradually introduced the "one-step" Kit per test medici.

Attualmente, nel nostro laboratorio clinico, la determinazione di antigeni macromolecolari come HBsAg, alfa-fetoproteina (α-fetoproteina, αFP), antigene prostatico specifico (PSA), marcatori della serie CA, hCG e ormoni, ecc. utilizzano fondamentalmente uno-metodo graduale. Rispetto al metodo in due fasi, il metodo in una fase è semplice da utilizzare, ma ha le sue carenze intrinseche. Se non viene gestito bene, i risultati dell'immunodosaggio a sandwich a doppio anticorpo saranno risultati falsi negativi o bassi quantitativi a causa dell'esistenza dell'effetto gancio.

2. Test di diritto competitivo della workstation ELISA

Small molecule haptens such as digoxin, theophylline and other drugs and hormones such as T3, T4, and testosterone may have only one epitope. Or because the molecule is too small, after binding to one antibody, it cannot bind to another antibody due to steric hindrance, so the double-antibody sandwich method cannot be used for measurement. The Stazione di lavoro ELISA can only use the competitive inhibition method.

In questa modalità di analisi, è necessario ottenere una combinazione di piccole molecole ed enzimi. La preparazione dei coniugati enzimatici di piccole molecole non è semplice come quella dei coniugati enzimatici degli anticorpi e anche la sua purificazione è abbastanza difficile. La differenza di peso molecolare tra l'enzima legato alla piccola molecola e l'enzima libero è piccola ed è difficile separarsi utilizzando metodi generali di setaccio molecolare. Pertanto, alcune persone cercano di stabilire un metodo ELISA da competizione a sandwich a doppio anticorpo per la determinazione di piccole molecole basate sulla sintesi di piccole molecole di o multimer. La sensibilità e la specificità della determinazione sono state migliorate.

3. Metodo indiretto di determinazione degli anticorpi nella workstation ELISA

Measure the antibodies produced by the body against pathogen antigens of infectious diseases, and the same is true for the Kit test anticorpo. Prima che sia difficile ottenere antigeni di elevata purezza e ben definiti, o quando gli antigeni sono più complicati, viene generalmente utilizzato il metodo indiretto.

Al giorno d'oggi, gli elementi di test clinici comunemente usati dell'anticorpo del virus dell'epatite C (anti-HCV) sono tutti metodi indiretti e il metodo indiretto viene utilizzato per rilevare gli anticorpi. A rigor di termini, viene misurata solo la classe di anticorpi IgG e le classi IgM e IgA non sono coinvolte. Questo è determinato dall'anticorpo secondario etichettato con l'enzima. Allo stato attuale, alcuni specifici kit di rilevamento degli anticorpi IgⅢ adottano il metodo indiretto.

4. Doppio metodo sandwich antigene della workstation ELISA

The antibodies measured by the double antigen sandwich method include all types of specific antibodies, and are not interfered by non-specific IgG. Therefore, the sensitivity and specificity of the double antigen sandwich method to detect antibodies are higher than the indirect method. At present, in order to improve the sensitivity of antibody determination, the kit of the Stazione di lavoro ELISA has basically adopted the double-antigen sandwich method, except that anti-HCV is more complicated due to its antigen.

5. Diritto della concorrenza della workstation ELISA

The determination of antibodies generally does not use a competition method. When the impurities in the antigen are difficult to remove or the binding specificity of the antigen is unstable, the Stazione di lavoro ELISA can use this mode to determine antibodies. The most typical example is the determination of hepatitis B virus core antibody (HBcAb) and hepatitis B virus e antibody (HBeAb).