A seconda della differenza nella determinazione di antigeni e anticorpi, esistono molte modalità di misurazione ELISA automatiche, come metodo diretto, metodo indiretto, metodo sandwich doppio anticorpo (diretto, indiretto), metodo di inibizione competitiva (diretto, sandwich, ecc.), metodo di cattura, ecc. Nei laboratori clinici, Le modalità di misurazione ELISA comunemente utilizzate includono il metodo sandwich a doppio anticorpo, il metodo indiretto, il metodo a sandwich a doppio antigene, il metodo di inibizione competitivo e il metodo di cattura.
Nella determinazione degli antigeni, la modalità più comunemente utilizzata per la determinazione degli antigeni della macromolecola proteica è il metodo del sandwich a doppio anticorpo. Per piccole molecole con un solo epitopo singolo, viene utilizzato il metodo di inibizione competitiva; La determinazione degli anticorpi di solito utilizza il metodo indiretto, il metodo a sandwich a doppio antigene, il metodo di inibizione competitivo e il metodo di cattura.
1. doppio anticorpo metodo sandwich di ELISA workstation
Per le proteine macromolecolari contenenti epitopi multipli, ilStazione di lavoro ELISAUsa il doppio metodo del sandwich dell'anticorpo per determinarlo è abbastanza semplice. I kit commerciali esistenti per la misurazione degli antigeni proteici adottano fondamentalmente questa modalità di misurazione.
I primi kit ELISA completamente automatici per il rilevamento di sandwich a doppio anticorpo di antigeni hanno tutti adottato il "metodo in due fasi". Successivamente, al fine di abbreviare il tempo di rilevamento e semplificare le fasi operative, i produttori di reagenti hanno gradualmente introdotto il "one-step"Kit per test medici.
Attualmente, nel nostro laboratorio clinico, la determinazione di antigeni macromolecolari come HBsAg, alfa-fetoproteina (α-fetoproteina, αFP), antigene prostatico specifico (PSA), marcatori della serie CA, hCG e ormoni, ecc. utilizzano fondamentalmente un metodo one-step. Rispetto al metodo in due fasi, il metodo in una fase è semplice da utilizzare, ma ha le sue carenze intrinseche. Se non viene gestito bene, i risultati dell'immunodosaggio a sandwich a doppio anticorpo saranno risultati falsi negativi o bassi quantitativi a causa dell'esistenza dell'effetto gancio.
2. Test di diritto competitivo della workstation ELISA
Gli apteni di piccole molecole come la digossina, la teofillina e altri farmaci e ormoni come T3, T4 e testosterone possono avere un solo epitopo. O perché la molecola è troppo piccola, dopo essersi legata a un anticorpo, non può legarsi a un altro anticorpo a causa di un ostacolo sterico, quindi il metodo del sandwich a doppio anticorpo non può essere utilizzato per la misurazione. La workstation ELISA può utilizzare solo il metodo di inibizione competitiva.
In questa modalità di analisi, è necessario ottenere una combinazione di piccole molecole ed enzimi. La preparazione dei coniugati enzimatici di piccole molecole non è semplice come quella dei coniugati enzimatici degli anticorpi e anche la sua purificazione è abbastanza difficile. La differenza di peso molecolare tra l'enzima legato alla piccola molecola e l'enzima libero è piccola ed è difficile separarsi utilizzando metodi generali di setaccio molecolare. Pertanto, alcune persone cercano di stabilire un metodo ELISA da competizione a sandwich a doppio anticorpo per la determinazione di piccole molecole basate sulla sintesi di piccole molecole di o multimer. La sensibilità e la specificità della determinazione sono state migliorate.
3. Metodo indiretto di determinazione degli anticorpi nella workstation ELISA
Misurare gli anticorpi prodotti dall'organismo contro gli antigeni patogeni delle malattie infettive, e lo stesso vale per ilKit test anticorpo. Prima che sia difficile ottenere antigeni di elevata purezza e ben definiti, o quando gli antigeni sono più complicati, viene generalmente utilizzato il metodo indiretto.
Al giorno d'oggi, gli elementi di test clinici comunemente usati dell'anticorpo del virus dell'epatite C (anti-HCV) sono tutti metodi indiretti e il metodo indiretto viene utilizzato per rilevare gli anticorpi. A rigor di termini, viene misurata solo la classe di anticorpi IgG e le classi IgM e IgA non sono coinvolte. Questo è determinato dall'anticorpo secondario etichettato con l'enzima. Allo stato attuale, alcuni specifici kit di rilevamento degli anticorpi IgⅢ adottano il metodo indiretto.
4. Doppio metodo sandwich antigene della workstation ELISA
Gli anticorpi misurati con il metodo del sandwich a doppio antigene includono tutti i tipi di anticorpi specifici e non sono interferiti da IgG non specifiche. Pertanto, la sensibilità e la specificità del metodo sandwich a doppio antigene per rilevare gli anticorpi sono superiori al metodo indiretto. Allo stato attuale, al fine di migliorare la sensibilità della determinazione dell'anticorpo, il kit della workstation ELISA ha sostanzialmente adottato il metodo sandwich a doppio antigene, tranne che l'anti-HCV è più complicato a causa del suo antigene.
5. Diritto della concorrenza della workstation ELISA
La determinazione degli anticorpi generalmente non utilizza un metodo di competizione. Quando le impurità nell'antigene sono difficili da rimuovere o la specificità di legame dell'antigene è instabile, la workstation ELISA può utilizzare questa modalità per determinare gli anticorpi. L'esempio più tipico è la determinazione dell'anticorpo centrale del virus dell'epatite B (HBcAb) e dell'anticorpo e del virus dell'epatite B (HBeAb).
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